PCR a qPCR v laboratóriu
PCR a qPCR v laboratóriu: ako vybaviť pracovisko pre molekulárnu biológiu
PCR (polymerázová reťazová reakcia) je metóda na amplifikáciu (namnoženie) konkrétneho úseku DNA, zatiaľ čo qPCR túto amplifikáciu sleduje v reálnom čase pomocou fluorescenčného signálu a umožňuje presné kvantitatívne vyhodnotenie. Pre prácu s RNA vzorkami sa navyše používa RT-PCR (reverzná transkripcia). V tomto článku si vysvetlíme rozdiely medzi jednotlivými metódami a ukážeme, aké reagencie a prístroje potrebujete na vybavenie moderného PCR pracoviska.
PCR a qPCR – dvojzávitnica DNA, ilustračná grafika
PCR, qPCR a RT-PCR – v čom je rozdiel?
| Metóda | Princíp | Vyhodnotenie |
|---|---|---|
| End-point PCR | Amplifikácia DNA | Po skončení reakcie (gélová elektroforéza) |
| qPCR (real-time) | Amplifikácia DNA so sledovaním v reálnom čase | Priebežne, fluorescenčný signál |
| RT-PCR | Reverzná transkripcia RNA → cDNA, následne PCR | Podľa nadväzujúcej PCR alebo qPCR |
Reagencie pre PCR a qPCR
V kategórii PCR & qPCR na Aloquence nájdete kompletný sortiment reagencií potrebných pre molekulárnu biológiu:
- DNA polymerázy – enzýmy nevyhnutné pre amplifikáciu DNA,
- PCR mastermixy – hotové zmesi pre end-point PCR,
- qPCR mastermixy a jednokrokové qPCR mastermixy pre kvantitatívnu PCR v reálnom čase,
- reverzná transkripcia – enzýmy a kity pre prácu s RNA,
- nukleotidy a ďalšie enzýmy pre PCR.
Izolácia DNA a RNA pred PCR
Kvalitná PCR analýza začína kvalitnou izoláciou nukleových kyselín. Kategória Extrakcia DNA & RNA zahŕňa DNA extrakciu, RNA extrakciu aj magnetickú separáciu.
Ochrana pred kontamináciou: PCR boxy
Príprava PCR reakcií si vyžaduje prostredie bez kontaminácie cudzorodou DNA. Preto je súčasťou každého PCR pracoviska PCR box – nájdete ho v kategórii biohazardy, digestory a PCR boxy, kde je aj podkategória priamo pre PCR boxy.
Spotrebný materiál pre PCR
Ku každej PCR reakcii patrí aj kvalitný spotrebný materiál: PCR skúmavky, PCR stripy, PCR platničky a PCR fólie nájdete v kategórii plasty pre PCR.
Najčastejšie otázky
Aký je rozdiel medzi PCR a qPCR?
Klasická PCR (end-point PCR) amplifikuje DNA a výsledok sa vyhodnocuje až po skončení reakcie, zvyčajne gélovou elektroforézou. qPCR (kvantitatívna PCR v reálnom čase) sleduje amplifikáciu priebežne pomocou fluorescenčného signálu, čo umožňuje presné kvantitatívne stanovenie počiatočného množstva DNA alebo RNA.
Čo je RT-PCR a kedy sa používa?
RT-PCR (reverzná transkripcia PCR) najskôr prepíše RNA do komplementárnej DNA (cDNA) pomocou reverznej transkriptázy a následne ju amplifikuje pomocou PCR. Používa sa pri práci s RNA vzorkami, napríklad pri detekcii vírusov alebo štúdiu génovej expresie.
Čo všetko potrebujem na vybavenie PCR laboratória?
Základné vybavenie PCR laboratória zahŕňa termocyklér alebo qPCR prístroj, PCR box (na prípravu vzoriek bez kontaminácie), automatické pipety, PCR mastermixy, DNA polymerázy, prípadne reverznú transkriptázu pre RT-PCR, a spotrebný materiál ako PCR skúmavky, stripy a platničky.
Potrebujete poradiť s výberom mastermixu alebo kompletným vybavením PCR laboratória? Kontaktujte tím Aloquence.