Co je to PCR a jak vybavit PCR laboratoř: zóny a přístroje
PCR laboratoř funguje spolehlivě jen tehdy, když je rozdělena na zóny a každá má vlastní přístroje, pipety a spotřební materiál. Polymerázová řetězová reakce namnoží cílový úsek DNA milionkrát, a stejně tak namnoží i kontaminaci. Proto se při zřizování laboratoře řeší nejen termocykler, ale i PCR box, oddělené prostory, minicentrifugy, pipety, elektroforéza a chlazení. V tomto přehledu vysvětlíme princip PCR, qPCR a RT-PCR a sestavíme seznam vybavení pro jednotlivé zóny.
Jak vybavit PCR laboratoř
zóny · PCR boxy · termocyklery · elektroforéza · chlazení
Co je PCR a čím se liší qPCR a RT-PCR?
PCR (polymerázová řetězová reakce) opakuje v termocykleru tři kroky: denaturaci DNA při 95 °C, nasednutí primerů při 50–65 °C a syntézu nového vlákna termostabilní polymerázou při 72 °C. Po 30 cyklech vznikne z jedné molekuly přibližně miliarda kopií, které se ověří elektroforézou v agarózovém gelu.
qPCR (PCR v reálném čase) měří nárůst produktu v každém cyklu fluorescencí a umožňuje kvantifikaci. RT-PCR (reverzní transkripce) nejprve přepíše RNA na cDNA, proto se používá u RNA virů a exprese genů; obě zkratky se často zaměňují, ale „RT“ znamená reverzní transkripci, nikoli reálný čas. Reagencie k jednotlivým metodám rozebírá článek PCR a qPCR v laboratoři.
Jaké vybavení pro PCR laboratoř najdete v Aloquence?
Přístroje a materiál pro PCR laboratoř jsou v několika kategoriích e-shopu. U každé uvádíme, co v ní hledat a do které zóny patří.
| Kategorie | Co v ní hledat |
|---|---|
| PCR boxy | Zóna přípravy mixu a přidávání templátu: UV PCR boxy Biosan s HEPA filtrací a UV sterilizací. |
| Termocyklery | Zóna amplifikace: gradientové termocyklery DLAB TC1000-G Pro a TC2000-G se třemi bloky. |
| Vortexy, termobloky a minicentrifugy | Vortex V-1 plus, kombinované minicentrifugy-vortexy Biosan FVL-2400N a MSC-6000, MSC-2P pro PCR destičky, termoblok DLAB H100-Pro. |
| Automatické pipety | Sady pipet pro každou zónu, vícekanálové pipety DLAB TopPette, elektronická dPette+, filtrační špičky. |
| Elektroforézy & blotování | Zóna analýzy produktu: horizontální elektroforézy Cleaver MultiSUB, zdroje DLAB DEP a PowerPro, transiluminátory, agaróza. |
| Mrazničky a hlubokomrazicí boxy | Laboratorní mrazničky Liebherr na –20 °C pro enzymy a primery, boxy –86 °C Eppendorf CryoCube pro vzorky RNA. |
| Plasty pro PCR a reagencie PCR & qPCR | PCR zkumavky, stripy, destičky a fólie; polymerázy, mastermixy, dNTP a kity Canvax. |
Zóna 1 a 2: příprava reakčního mixu a přidávání templátu
První zóna je „čistá“: připravuje se v ní mastermix bez templátu v UV PCR boxu Biosan UVC/T-AR s recirkulací přes HEPA filtr a UV lampou pro dekontaminaci pracovní plochy mezi sériemi. Patří sem vyhrazené pipety s filtračními špičkami, vortex V-1 plus a minicentrifuga-vortex Combi-Spin FVL-2400N pro krátké stočení zkumavek.
Druhá zóna slouží k izolaci nukleových kyselin a přidávání templátu; postupy a kity popisuje článek Extrakce DNA a RNA. Při práci s klinickými vzorky použijte biohazardový box třídy II; k lyzi při stálé teplotě poslouží termoblok DLAB H100-Pro.
Zóna 3: amplifikace v termocykleru
Srdcem laboratoře je termocykler: DLAB TC1000-G Pro s gradientovým blokem 96 × 0,2 ml umožní optimalizovat teplotu nasednutí primerů v jednom běhu, TC2000-G se třemi nezávislými bloky spustí tři protokoly najednou. Pro qPCR vyberte přístroj s optickým modulem a k němu mastermixy se správnou variantou ROX.
Destičky před vložením do cykleru stočte na minicentrifuze-vortexu MSC-2P pro PCR destičky; reakce připravujte v tenkostěnných PCR plastech (zkumavky, stripy, destičky s qPCR fólií).
Zóna 4: analýza produktu a chlazení
Produkty PCR ověříte v horizontální elektroforéze Cleaver MultiSUB Mini nebo MultiSUB Midi se zdrojem DLAB DEP, gel odlijete ze standardní agarózy BIOSOLUTE a prohlédnete na transiluminátoru safeVIEW MINI2 s modrým světlem bez UV; více v článku Elektroforéza a blotting. Tato zóna je od ostatních oddělena, aby se amplikony nedostaly zpět do přípravy.
Chlazení: enzymy, primery a mastermixy uchovávejte v laboratorní mrazničce Liebherr při –20 °C, vzorky RNA a buňky v hlubokomrazicím boxu Eppendorf CryoCube F440 (–86 °C); přehled poskytuje článek Chladicí technika pro laboratoře.
Jak navrhnout PCR laboratoř?
Rozhoduje typ vzorků, očekávaný počet reakcí a dostupný prostor. Při návrhu si ověřte:
- Jednosměrný tok: od čisté zóny přes templát a amplifikaci k analýze; materiál ani personál se nevracejí zpět bez převlečení a dekontaminace.
- Vyhrazené vybavení: každá zóna má vlastní pipety, špičky, stojany, pláště a odpad; pipety označte barvou zóny.
- Dekontaminaci: UV v PCR boxu, pracovní plochy otírejte roztoky na odstranění DNA, používejte filtrační špičky.
- Průchodnost: počet vzorků rozhoduje mezi 96jamkovým termocyklerem, víceblokovým modelem a automatizací pipetování.
- Chladicí řetězec: –20 °C pro reagencie, –80 °C pro RNA; záložní zdroj a monitorování teploty.
V klinické diagnostice doplňte systém kvality (negativní a pozitivní kontroly v každém běhu, validace metod) podle požadavků akreditace.
Jak objednat vybavení PCR laboratoře u Aloquence?
Přístroje, plasty a reagencie pro PCR můžete v Aloquence objednat přes e-shop, na základě cenové nabídky nebo zasláním objednávky e-mailem. Vyberte si postup, který vyhovuje pravidlům vašeho pracoviště:
- Nákup přes e-shop: vyberte přístroje v kategoriích Termocyklery, PCR boxy a Elektroforézy, reagencie v PCR & qPCR.
- Žádost o cenovou nabídku: pošlete nám název nebo katalogové číslo položky a požadované množství na info@aloquence.com. Připravíme i nabídku do veřejné zakázky.
- Přímá objednávka: můžete nám zaslat i objednávkový dokument, například ve formátu PDF, s fakturačními a dodacími údaji.
Při zřizování nové laboratoře připravíme kompletní návrh vybavení po zónách včetně instalace, zaškolení a servisu přístrojů.
Zřizujete PCR laboratoř nebo ji rozšiřujete?
Prohlédněte si nabídku nebo nám napište, jaké vzorky a kolik reakcí plánujete, a navrhneme sestavu po zónách.
Časté otázky o vybavení PCR laboratoře
Kolik místností potřebuje PCR laboratoř?
Ideálně tři oddělené prostory (příprava mixu, zpracování vzorků, amplifikace a analýza); v menších laboratořích lze zóny oddělit PCR boxy a jednosměrným tokem v jedné místnosti, analýza produktů však má být vždy prostorově oddělená.
Potřebuji PCR box, pokud mám biohazardový box?
Biohazardový box chrání pracovníka a vzorek před mikroorganismy; PCR box s UV lampou slouží k dekontaminaci amplikonů a DNA při přípravě mixu. U klinických vzorků jsou potřeba oba.
Co je gradientový termocykler a proč ho vybrat?
Gradientový blok udržuje v různých sloupcích různou teplotu nasednutí primerů, takže optimalizaci nového protokolu zvládnete v jednom běhu místo několika.
Kde koupit vybavení pro PCR laboratoř?
V e-shopu aloquence.eu v kategoriích Termocyklery, PCR boxy, Elektroforézy a PCR & qPCR, případně na základě cenové nabídky na info@aloquence.com.
Připravila Aloquence, s. r. o. | aktualizováno 22. října 2026
Zdroje a další informace
Přehled vychází z podkladů výrobců DLAB, Biosan, Cleaver Scientific a Canvax a ze sortimentu Aloquence. Uspořádání laboratoře přizpůsobte požadavkům akreditace a platným předpisům.