Elektroforéza a blotting: agaróza, gely, markery a přístroje
Elektroforéza rozdělí DNA, RNA nebo proteiny podle velikosti v gelu pod napětím; blotting je přenese na membránu, kde se detekují protilátkami. Výsledek závisí na kvalitě agarózy či gelu, správném markeru a stabilním zdroji napětí. V Aloquence nabízíme agarózy Biosolute a AgaPure, laddery a markery Canvax, precast gely PriPROT, pufry, barviva a přístroje Cleaver Scientific. V tomto přehledu zjistíte, co potřebujete a jak vybrat.
Elektroforéza a blotting
Biosolute · Canvax · Cleaver Scientific · SERVA
Jak funguje elektroforéza a Western blot?
Nukleové kyseliny se dělí v agarózovém gelu (0,7–3 %) v pufru TAE nebo TBE; záporně nabitá DNA putuje k anodě a kratší fragmenty běží rychleji. Velikost se odečte porovnáním s DNA ladderem a fragmenty se zviditelní barvivem, dnes nejčastěji bezpečnou alternativou ethidiumbromidu. Proteiny se dělí v polyakrylamidovém gelu (SDS-PAGE), kde SDS sjednotí náboj a separace probíhá pouze podle hmotnosti; prestained marker umožní sledovat průběh.
Western blot přenese proteiny z gelu na nitrocelulózovou nebo PVDF membránu elektrickým polem; membrána se zablokuje, inkubuje s primární a sekundární protilátkou a signál se vyvolá chemiluminiscenčně nebo chromogenně. Klíčové je stabilní napětí, rovnoměrný přenos a vhodný marker pro kontrolu přenosu.
Jaký sortiment pro elektroforézu najdete v Aloquence?
Reagencie jsou zařazeny v kategorii Elektroforéza a blotting, přístroje v kategorii přístrojů a v sortimentu SERVA. U každé podkategorie uvádíme, co v ní hledat.
| Kategorie | Co v ní hledat |
|---|---|
| Agarózy | Standardní a low EEO agaróza Biosolute 500 g, AgaPure tablety (i s barvivem GreenSafe), low melting agaróza. |
| DNA laddery a proteinové markery | BrightMAX DNA laddery 100–1500, 100–2000 a 500–10 000 bp, PriBLUE prestained markery 10–250 kDa, PriRULER unstained laddery, PriPROT Western marker. |
| Proteinová elektroforéza a blotting | Precast Tris-glycinové gely PriPROT 12 % a 4–20 %, 1,0 mm. |
| Nanášecí pufry a barviva | 6× loading buffery (B, BX, OX), proteinový loading buffer PriPROT, GreenSafe DNA gel stain. |
| SERVA Electrophoresis | Akrylamid, Tris-glycinové a Tris-tricinové pufry, SERVA Blue, barvení stříbrem, SERVAGel, IPG stripy, substráty pro blot. |
| Přístroje Cleaver Scientific | Horizontální vany multiSUB Mini a Midi, Mini PAGE a Western blotting kity, zdroj NanoPAC 500, transiluminátory duoVIEW a Standard UV. |
Agarózová elektroforéza DNA a RNA
Pro rutinní kontrolu PCR produktů stačí standardní agaróza Biosolute, pro ostré proužky a nízké pozadí agaróza s nízkou elektroendoosmózou. Čas ušetří AgaPure agarózové tablety s přesnou navážkou a tablety s barvivem GreenSafe; k izolaci fragmentů z gelu je určena low melting agaróza.
Velikost fragmentů určíte ladderem BrightMAX 100–1500 bp, 100–2000 bp nebo 500–10 000 bp; vzorky nanášejte s 6× loading bufferem a vizualizujte bezpečným barvivem GreenSafe DNA gel stain, které nahrazuje ethidiumbromid.
SDS-PAGE a Western blot
Pro proteinovou elektroforézu bez lití gelů nabízíme precast gely PriPROT 12 % a gradientové 4–20 %, ke kterým patří 6× proteinový loading buffer. Průběh separace a účinnost přenosu sledujte prestained markery PriBLUE VI 10–250 kDa nebo PriBLUE IV 10–180 kDa; ke kalibraci hmotnosti slouží unstained laddery PriRULER a pro blot PriPROT Western marker.
Širokou nabídku reagencií pro vlastní gely, barvení a blotting (akrylamid, pufry, SERVA Blue, barvení stříbrem, substráty TMB a BCIP/NBT) najdete v sortimentu SERVA; přehled v článku SERVA: reagencie pro elektroforézu a proteomiku.
Elektroforetické vany, zdroje a dokumentace gelů Cleaver Scientific
Pro agarózovou elektroforézu nabízíme horizontální vany multiSUB Mini a multiSUB Midi, pro proteiny Mini PAGE & Western blotting kit s reagenciemi, který obsahuje vertikální vanu i blotovací modul. Napětí dodá zdroj NanoPAC 500 (500 V, 400 mA).
Gely zdokumentujete na transiluminátoru duoVIEW Mini s UV a modrým světlem pro bezpečná barviva nebo na Standard UV transiluminátoru; oči chraňte brýlemi pro gelové systémy.
Jak vybrat reagencie a přístroje pro elektroforézu?
Rozhoduje typ molekuly, velikost fragmentů a počet vzorků. Před objednáním si ověřte:
- Molekulu: agaróza a DNA laddery pro nukleové kyseliny, polyakrylamid a proteinové markery pro proteiny.
- Rozsah velikostí: ladder musí pokrývat očekávané fragmenty; koncentrace gelu 0,7 % pro velké, 2–3 % pro malé fragmenty.
- Precast nebo vlastní gely: precast pro reprodukovatelnost a úsporu času, vlastní pro speciální složení a nízkou cenu.
- Barvivo: GreenSafe pro modré světlo a bezpečnost, ethidiumbromid pouze s UV a přísnou likvidací.
- Přístroje: velikost vany podle počtu vzorků, zdroj s dostatečným napětím a proudem, transiluminátor kompatibilní s barvivem.
U Western blotu ověřte přenos barvením membrány Ponceau S ještě před blokováním; ušetří vám to opakování celého experimentu.
Jak objednat reagencie pro elektroforézu u Aloquence?
Agarózy, gely, markery, pufry a přístroje pro elektroforézu můžete v Aloquence objednat přes e-shop, na základě cenové nabídky nebo zasláním objednávky e-mailem. Vyberte si postup, který vyhovuje pravidlům vašeho pracoviště:
- Nákup přes e-shop: vyberte položky v kategorii Elektroforéza a blotting a přidejte je do košíku.
- Žádost o cenovou nabídku: pošlete nám název nebo katalogové číslo položky a požadované množství na info@aloquence.com. Připravíme i nabídku do veřejné zakázky.
- Přímá objednávka: můžete nám zaslat také objednávkový dokument, například ve formátu PDF, s fakturačními a dodacími údaji.
Precast gely a markery dodáváme chlazené přímo od výrobce; při vybavení nové laboratoře připravíme kompletní nabídku vany, zdroje a dokumentace.
Vybavujete laboratoř pro elektroforézu a Western blot?
Prohlédněte si nabídku nebo nám napište, co analyzujete a kolik vzorků, a sestavíme kompletní sadu.
Časté dotazy k elektroforéze a blottingu
Čím nahradit ethidiumbromid?
Bezpečnými barvivy, jako je GreenSafe, která se váží na DNA a excitují se modrým nebo UV světlem; nejsou mutagenní, nevyžadují speciální likvidaci a mají srovnatelnou citlivost.
Jaký je rozdíl mezi prestained a unstained markerem?
Prestained marker má kovalentně navázané barvivo, vidíte ho během běhu i po přenosu na membránu; unstained ladder je přesnější pro určení hmotnosti, ale zviditelní se až po barvení.
Co znamená agaróza low EEO?
Nízkou elektroendoosmózu, tedy minimální zpětný tok pufru gelem; proužky jsou ostřejší a migrace odpovídá velikosti fragmentů přesněji.
Kde koupit agarózu, markery a elektroforetické vany?
V e-shopu aloquence.eu v kategorii Elektroforéza a blotting, případně na základě cenové nabídky na info@aloquence.com.
Připravila společnost Aloquence, s. r. o. | aktualizováno 22. října 2026
Zdroje a další informace
Přehled vychází z podkladů výrobců Canvax Biotech, Biosolute, Cleaver Scientific a SERVA a ze sortimentu Aloquence. Protokoly ověřte v manuálu konkrétního produktu.