PCR a qPCR v laboratoři: polymerázy, mastermixy, cyklery a plasty
PCR namnoží jediný úsek DNA na miliardy kopií; qPCR k tomu přidá kvantifikaci v reálném čase a RT-qPCR měří expresi genů z RNA. Výsledek závisí na polymeráze, složení mastermixu, kvalitě plastů a přesnosti termocykleru. U Aloquence nabízíme reagencie Canvax (Horse-Power, HotBegan, qMAXSen, FastPANGEA), termocyklery DLAB, PCR plasty a UV boxy. V tomto přehledu zjistíte, co potřebujete pro PCR a qPCR a jak vybrat.
PCR a qPCR v laboratoři
Canvax · DLAB · Biosan · Greiner Bio-One · BRAND · LABSOLUTE
Jak funguje PCR, qPCR a RT-qPCR?
PCR cyklicky opakuje denaturaci DNA (95 °C), nasednutí primerů (50–65 °C) a syntézu nového vlákna termostabilní DNA polymerázou (72 °C); po 25–40 cyklech vznikne dostatek produktu pro elektroforézu, klonování nebo sekvenování. Hot start polymerázy se aktivují až při zahřátí, čímž potlačí nespecifické produkty, high-fidelity polymerázy mají korekční aktivitu pro klonování bez mutací.
qPCR sleduje nárůst produktu v každém cyklu fluorescencí interkalačního barviva (SYBR Green) nebo hydrolyzační sondy (TaqMan) a z hodnoty Cq vypočítá původní množství templátu. RT-qPCR nejprve přepíše RNA na cDNA reverzní transkriptázou, buď v samostatném kroku (two-step), nebo v jedné zkumavce (one-step), což se používá v diagnostice virů a při expresních analýzách.
Jaký sortiment pro PCR a qPCR najdete u Aloquence?
Reagencie jsou zařazeny v kategorii PCR a qPCR, přístroje a plasty v souvisejících kategoriích. U každé podkategorie uvádíme, co v ní hledat.
| Kategorie | Co v ní hledat |
|---|---|
| DNA polymerázy | Horse-Power Taq a Green-Taq, HotBegan Hot Start Taq, SNP Taq, FastPANGEA High-Fidelity a Long PCR, GC PCR Enhancer kit, T4 a E. coli DNA polymeráza I. |
| Mastermixy | HotBegan Hot Start Green a Red mastermixy s nanášecím barvivem, AmplyMAX Multiplex PCR Master Mix. |
| qPCR mastermixy a one-step kity | qMAXSen Green qPCR mastermix (high ROX, low ROX, bez ROX), qMAXSen One-Step Probe a Green RT-qPCR kity. |
| Reverzní transkripce | First Strand cDNA Synthesis Kit, M-MLV a AMV reverzní transkriptáza. |
| Nukleotidy a enzymy | TruePure dNTP set a jednotlivé dNTP 100 mM, DNáza I RNase-free, proteináza K, CIAP fosfatáza. |
| Termocyklery a PCR boxy | Gradientové termocyklery DLAB TC1000-G Pro (blok 96 × 0,2 ml) a TC2000-G se třemi bloky, UV PCR boxy Biosan. |
| Plasty pro PCR | PCR zkumavky, stripy a destičky Greiner Sapphire, LABSOLUTE a BRAND, qPCR fólie, filtrační špičky. |
Polymerázy a mastermixy pro klasickou PCR
Pro rutinní PCR a genotypizaci doporučujeme Horse-Power Taq DNA polymerázu, případně Green-Taq s barvivem pro přímé nanesení na gel nebo výhodnou sadu Taq s dNTP. Pro náročné templáty s vysokým obsahem GC přidejte GC PCR Enhancer kit.
Nespecifické produkty potlačí HotBegan Hot Start Taq nebo hotové mastermixy HotBegan Green a HotBegan Red; více cílů najednou amplifikuje AmplyMAX Multiplex PCR Master Mix. Pro klonování a sekvenování bez chyb použijte FastPANGEA High-Fidelity, pro dlouhé fragmenty FastPANGEA Long PCR; pro čisté reakce dodáme TruePure dNTP set.
qPCR, RT-qPCR a reverzní transkripce
Pro qPCR s interkalačním barvivem vyberte qMAXSen Green qPCR mastermix ve variantě ROX, kterou vyžaduje váš přístroj (high ROX, low ROX nebo bez ROX). K detekci virové RNA a expresním analýzám v jednom kroku slouží qMAXSen One-Step Probe RT-qPCR kit se sondami a One-Step Green RT-qPCR kit.
Při dvoukrokovém postupu přepište RNA pomocí First Strand cDNA Synthesis Kit, M-MLV nebo AMV reverzní transkriptázy; genomovou DNA odstraňte DNázou I RNase-free. RNA a DNA pro reakce izolujte kity z článku Extrakce DNA a RNA.
Termocyklery, PCR boxy a plasty
K optimalizaci teploty nasednutí primerů slouží gradientové termocyklery DLAB TC1000-G Pro s blokem 96 × 0,2 ml a TC2000-G se třemi nezávislými bloky, na kterých běží tři programy najednou. Reakce připravujte v UV PCR boxu Biosan, abyste vyloučili kontaminaci.
Plasty s tenkou stěnou zaručí rychlý přenos tepla: Greiner SAPPHIRE PCR zkumavky, 8-tube stripy LABSOLUTE, BRAND 96jamkové destičky s qPCR fóliemi a filtrační špičky; přehled najdete v článku Canvax: reagencie pro PCR a elektroforézu.
Jak vybrat polymerázu a vybavení pro PCR?
Rozhoduje aplikace, templát a vybavení laboratoře. Před objednáním si ověřte:
- Aplikaci: rutinní detekce (Taq), klonování a sekvenování (high-fidelity), multiplex (speciální mastermix), kvantifikace (qPCR), RNA (RT-qPCR).
- Hot start: pro citlivé a multiplexové reakce, práci při pokojové teplotě a automatizaci.
- Formát mastermixu: hotový mix s barvivem šetří čas, samostatná polymeráza umožňuje optimalizaci.
- Kompatibilitu s přístrojem: správná varianta ROX pro qPCR cykler, správný profil plastů (0,2 ml, nízký nebo standardní profil).
- Kontaminaci: UV box, filtrační špičky a oddělené prostory pro přípravu mixu a přidávání templátu.
Primery a reagencie alikvotujte a skladujte při –20 °C; opakované rozmrazování mastermixů snižuje účinnost.
Jak objednat reagencie a přístroje pro PCR?
Polymerázy, mastermixy, termocyklery a PCR plasty můžete u Aloquence objednat přes e-shop, na základě cenové nabídky nebo zasláním objednávky e-mailem. Vyberte si postup, který vyhovuje pravidlům vašeho pracoviště:
- Nákup přes e-shop: vyberte reagencie v kategorii PCR a qPCR, přístroje v Termocyklerech a plasty v Plastech pro PCR.
- Žádost o cenovou nabídku: pošlete nám název nebo katalogové číslo položky a požadované množství na info@aloquence.com. Připravíme i nabídku do veřejné zakázky.
- Přímá objednávka: můžete nám zaslat i objednávkový dokument, například ve formátu PDF, s fakturačními a dodacími údaji.
Enzymy a mastermixy dodáváme na suchém ledu přímo od výrobce; při zavádění nových reagencií umíme zajistit testovací balení.
Zavádíte PCR nebo qPCR v laboratoři?
Prohlédněte si nabídku nebo nám napište, co amplifikujete a na jakém přístroji, a doporučíme vhodné reagencie.
Časté dotazy k PCR a qPCR
Jaký je rozdíl mezi Taq a high-fidelity polymerázou?
Taq polymeráza je rychlá a robustní, ale bez korekční aktivity dělá přibližně jednu chybu na 10⁴–10⁵ bází; high-fidelity polymeráza (např. FastPANGEA) má 3′→5′ exonukleázovou aktivitu a chybovost až 50krát nižší, proto se používá pro klonování a sekvenování.
Co je ROX a kterou variantu potřebuji?
ROX je pasivní referenční barvivo pro normalizaci signálu. Přístroje Applied Biosystems vyžadují high nebo low ROX podle modelu, přístroje Bio-Rad, Roche či Qiagen ROX nepotřebují; ověřte v návodu cykleru.
Kdy použít one-step a kdy two-step RT-qPCR?
One-step je rychlejší, s menším rizikem kontaminace a vhodný pro diagnostiku a sériové vzorky; two-step umožňuje z jedné cDNA měřit více genů a je flexibilnější pro expresní studie.
Kde koupit reagencie a termocyklery pro PCR?
V e-shopu aloquence.eu v kategorii PCR a qPCR a v kategorii Termocyklery, případně na základě cenové nabídky na info@aloquence.com.
Připravila Aloquence, s. r. o. | aktualizováno 22. října 2026
Zdroje a další informace
Přehled vychází z podkladů výrobců Canvax Biotech, DLAB a Biosan a ze sortimentu Aloquence. Reakční podmínky ověřte v manuálu konkrétního enzymu nebo kitu.